紫外可見(jiàn)分光光度計是基于紫外可見(jiàn)分光光度法原理,用來(lái)測量待測物質(zhì)對可見(jiàn)光或紫外光(200~760nm)的吸光度并進(jìn)行定量分析的儀器??梢詼y定核酸和蛋白的濃度,也可以測定細菌細胞密度。
紫外可見(jiàn)分光光度計的用途介紹:
1、對物質(zhì)進(jìn)行分析鑒定,紫外可見(jiàn)分光光度計在制藥行業(yè)有著(zhù)很大的前景。根據國內外的書(shū)籍記載,已經(jīng)把很多的藥品紫外線(xiàn)吸收波長(cháng)和相對應的詳細參數記錄起來(lái),給藥品分析帶來(lái)了很大的方便。
2、對比分析,把需要測定的樣品與標準樣品放在同等環(huán)境下進(jìn)行測量。如果兩種樣品得到的檢測結果*一樣,就表明這兩種樣品是同種物質(zhì)。要是沒(méi)有標準樣品的話(huà),可以選擇跟已知的標準圖譜對比分析,這種辦法對儀器的要求相當高,檢測環(huán)境要求*。
3、在化學(xué)學(xué)科上的應用,其可以檢驗化學(xué)物質(zhì)的純度,同時(shí)也可以推算物質(zhì)的原子結構,還可以對物質(zhì)之間的氫鍵進(jìn)行測定。特別是在有機化學(xué)方向的運用,前景更是廣闊,能夠對成分比較復雜的有機化合物進(jìn)行成分鑒定。
紫外可見(jiàn)分光光度計的主要指標介紹:
(1)波長(cháng)范圍
波長(cháng)范圍是指儀器上、下限波長(cháng)之間的工作范圍,是與光源色器及檢測器的光譜響應特性有關(guān)。有的儀器在波長(cháng)范圍兩端缺乏足夠的能量,難以正常工作。
(2)波長(cháng)準確度
波長(cháng)準確度是指儀器測定時(shí)標稱(chēng)的波長(cháng)值與儀器出射的光線(xiàn)實(shí)際波長(cháng)值參考值或理論值)之間的符合程度,一般用多次波長(cháng)測量值平均值與參考值之差(即波長(cháng)誤差)來(lái)衡量。
(3)波長(cháng)重復性
波長(cháng)重復性是儀器在相同測試條件下、一個(gè)較短的時(shí)間內,對同一吸收或發(fā)射譜線(xiàn)進(jìn)行連續多次波長(cháng)測量,測量結果的一致性。也稱(chēng)波長(cháng)精密度,即多次波長(cháng)測試數據的符合程度。波長(cháng)重復性一般用多次波長(cháng)測試數據的離散性,即取波長(cháng)準確度多次測試結果中最大值與最小值之差來(lái)衡量。
(4)光譜帶寬
光譜帶寬指從經(jīng)過(guò)單色器后從出射狹縫出來(lái)的單色光的譜線(xiàn)輪曲線(xiàn)中峰高一半高度處的譜帶寬度。光譜帶寬可以表征儀器的光譜分辨率。光學(xué)帶寬越小越好,儀器一般可通過(guò)調窄狹縫,使光譜帶寬變小,但是同時(shí)光源能量弱,可能影響儀器對信號的檢測,降低儀器的靈敏度。光源輝線(xiàn)或一些較尖銳的吸光譜都可用于光譜帶寬的檢查。
(5)雜散光
雜散光是指到達檢測器的任何被測波長(cháng)以外的其它波長(cháng)的光。一般用在某規定的波長(cháng)下測定在理論上該波長(cháng)下*不吸收的某種標準物質(zhì)的透射比來(lái)衡量。如紫外區可用Nal溶液測定波長(cháng)為220nm處的雜散光,在可見(jiàn)區可用各種有色玻璃截止濾光片。雜散光是光譜測量中誤差的主要來(lái)源。雜散光越小越好。
(6)分辨率
分辨率是指儀器對于緊密相鄰的峰可分辨的最小波長(cháng)間隔,是衡量分光光度計性能的重要指標之一。單色器輸出的單色光的光譜純度、強度以及檢測器的光譜靈敏度等是影響儀器分辨率)主要因素。新版的檢定規程已取消分辨率要求,一般可用最小光譜帶寬來(lái)衡量。
(7)光度準確度與透射比誤差
光度準確度是吸光度測量的準確程度,一般用透射比標準物質(zhì)實(shí)測吸光度值與其標準值之差(吸光度誤差)衡量。因為吸光度誤差在整個(gè)量程范圍內的示值是非線(xiàn)性的》,因此用吸光度表示光度準確度時(shí),必須定其吸光度范圍。光度準確度也可用透射比表示,即透射比準確度,一般用透射比誤差(實(shí)測透射比值與其標準值之差)來(lái)衡量。透射比誤差是一個(gè)反映儀器綜合性能的指標,與波長(cháng)準確度、雜散光、儀器穩定性等眾多因素有關(guān)。
(8)光度重復性與透射比重復性
光度重復性是在相同的儀器上、相同條件如儀器波長(cháng)、光譜帶寬不變,在短時(shí)間對同一樣品進(jìn)行多次重復測定吸光度,所測得值的一致性。光度重復性是影響分析結果可靠性的最主要因素,是關(guān)鍵性技術(shù)指標,一般用多次重復測量吸光度的最大值與最小值之差來(lái)衡量。如按同樣方式測定透射比,即為透射比重復性。
(9)噪聲
噪聲是信號隨時(shí)間而無(wú)規則的變化。噪聲測量的方法是在儀器預熱穩定后,在一定波長(cháng)和一定光譜帶寬下,分別掃描透射比100%或O透射比幾分鐘(一般取2min),量取獲得圖譜中最大值至最小值之間的值作為絕D噪聲水平。如掃描較長(cháng)時(shí)間,一般30min,可獲得漂移。但在實(shí)際測定中,常用信噪比來(lái)描述儀的性能,如在100%線(xiàn)掃描時(shí),噪聲是1%,則信噪比為100:1。這個(gè)指標也是越小越好。
(1O)基線(xiàn)平直性
基線(xiàn)平直性是吸收池中不放任何東西時(shí)掃描基線(xiàn)(100%T線(xiàn)或OA線(xiàn)),基線(xiàn)傾斜彎曲的程度,它是儀器的重要性能指標之一。一般用掃描圖譜中起點(diǎn)吸光度與偏離起點(diǎn)吸光度(取最大偏離點(diǎn))之差來(lái)衡量。